親水親脂平衡柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水的流動(dòng)相體系中的。
①在平衡之前，請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶；
②新柱應(yīng)先以10－20倍柱體積的甲醇或純乙腈作流動(dòng)相沖洗。
③如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽或離子對(duì)試劑，應(yīng)注意在乙腈沖洗后用高比例水"過渡"。即每天分析開始前必須先用高比例水沖洗30分鐘以上（防止鹽析出），再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡；分析結(jié)束后須先用高比例水沖洗30分鐘以上，除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘（保護(hù)柱子）。
親水親脂平衡柱的柱平衡對(duì)分離的影響，先解釋一下，當(dāng)流動(dòng)相流經(jīng)過干燥的固定相的時(shí)候，發(fā)生了什么。
1、干燥活性硅膠，迅速吸收溶劑進(jìn)入其孔隙當(dāng)中和表面，尤其是一些極性溶劑，吸收更加明顯。
2、吸收過程中，溶劑將殘留在孔隙中大空氣趕跑，要將整個(gè)柱子里面的氣泡全部排凈，大約需要兩到三個(gè)柱體積。
3、柱平衡過程中，溶劑吸附到硅膠基質(zhì)上面，會(huì)放出大量的熱量，體系內(nèi)溫度會(huì)隨之上升，很有可能流動(dòng)相在這個(gè)過程中會(huì)達(dá)到沸點(diǎn)（流速越大，極性越高，產(chǎn)生的熱量就越多），同時(shí)這個(gè)熱量消散的速度也比較快，往往溶劑前沿部分熱量較高，一個(gè)柱體積后即可回到室溫。同時(shí)，溫度上升也會(huì)導(dǎo)致在流動(dòng)相接觸到篩板的時(shí)候，會(huì)產(chǎn)生比較大的背壓。
4、當(dāng)起始熱量消散后，硅膠表面會(huì)繼續(xù)吸收溶劑極性成分，柱平衡充分運(yùn)行之后，吸收的極性溶劑成分也會(huì)慢慢的趨于平緩，例如：在乙酸乙酯和正己烷的體系當(dāng)中，在充分的柱平衡過程中，色譜柱上下兩端的乙酸乙酯的濃度的差異性會(huì)逐漸趨于相同。
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